Criopreservación de células estromales derivadas del tejido adiposo: comparación de diferentes medios de criopreservación / Cryopreservation of adipose derived stromal cells: comparison of different cryopreservation media

Objetivo Obtener células estromales derivadas del tejido adiposo, medir y comparar las tasas de viabilidad antes e inmediatamente después un ciclo de criopreservación con diferentes combinaciones de criopreservantes de manera de obtener el mejor medio de criopreservación. Material y método Medición de la tasa de viabilidad poscriopreservación de células estromales derivadas del tejido adiposo obtenidas de 5 pacientes utilizando medios definidos (DMEM/Ham F12) libres de suero bovino y suplementados con una de los siguientes combinaciones de compuestos: dimetilsulfóxido (DMSO) 10%; DMSO 10% + trehalosa 7,6%; DMSO 10% + albúmina humana 10% y DMSO 10% + trehalosa 7,6% + albúmina humana 10%, mediante citometría de flujo con ioduro de propidio. Resultados No existen diferencias estadísticamente significativas en las tasas de viabilidad de las células estromales posterior a un ciclo de criopreservación. Sin embargo, se observa una tendencia a mejorar la tasa de recuperación de células vitales al agregar albúmina humana. Conclusiones No se observaron diferencias significativas entre las condiciones estudiadas, sugiriendo que ninguna es superior a las demás en cuanto a rendimiento. Es así como podemos afirmar que la criopreservación de las células estromales derivadas del tejido adiposo en un medio que combine DMEM/F12 con DMSO 10% + trehalosa 7,6% + albúmina humana 10% no logra una tasa de recuperación de células vitales significativamente mayor que las congeladas solo con DMSO 10%.

Aim To obtain stromal cells derived from adipose tissue, to measure and compare viability rates before and immediately after cryopreservation cycle, using different combinations of cryoprotective agents in order to identify the best cryopreservation medium. Material and method Viability rate after cryopreservation of stromal cells derived from adipose tissue were assessed by flow cytometry with propidium iodide. Samples of stromal cells obtained from 5 patients were kept defined, bovine serum-free media (DMEM/Ham-F12), supplemented with one of the following combinations of compounds: 10% dymethylsulfoxide (DMSO); Trehalose 10% DMSO + 7.6%; 10% DMSO + 10% human albumin and 10% DMSO + 7.6% Trehalose + 10% human albumin. Results No statistically significant differences were observed in the viability rates of stromal cells derived from adipose tissue after a cryopreservation cycle. However, we observed a tendency towards improvement of recovery rate when human albumin was added to the medium. Conclusions None of the studied conditions proved superior to others in terms of cell vitality after a cryopreservation cycle. Hence, we conclude that the cryopreservation of stromal cells derived from adipose tissue in an environment that combines DMEM/F12 with 10% DMSO + 7.6% Trehalose + human albumin 10% does not achieve a significantly higher recovery rate than only frozen solely with DMSO 10%.

Evaluación de la fibroína de seda como biomaterial de soporte para el crecimiento de células mesenquimales estromales de pulpa dental / Evaluation of silk fibroin as a support biomaterial for the growth of stromal mesenchymal cells of dental pulp

La regeneración de tejidos usando células, factores de crecimiento y soportes constituyen una alternativa en la Medicina Regenerativa. La fibroína de seda es un excelente biosoporte, sus propiedades mecánicas únicas le permiten soportar procesos de adhesión y crecimiento celular. Objetivo. Evaluar la fibroína de la seda obtenida del gusano de seda Bombyx mori L como material de soporte para el crecimiento de células mesenquimales estromales de pulpa dental (CMPD). Métodos. La fibroína obtenida a partir de capullos de gusanos de seda Bombyx mori L criados en la Granja El Pílamo, propiedad de la Universidad Tecnológica de Pereira, se empleó para la fabricación de películas de fibroína íntegras y resistentes a condiciones de cultivo. Las CMPD fueron obtenidas a partir de un donante de diente premolar, la pieza dental se cortó con disco de diamante para la obtención de la pulpa que fue sometida a disgregación enzimática. Las células obtenidas se subcultivaron hasta el segundo pase, para posteriormente transferirse a cajas de cultivo que contenían películas de fibroína, se sometieron a condiciones inherentes al proceso de incubación siguiendo su crecimiento y viabilidad celular durante 27 días. Resultados. Al final del periodo de incubación, se observaron películas integras, estables y resistentes que permitieron el crecimiento celular. Conclusión. Se plantea el uso de fibroína como un biopolímero natural que brinda un soporte mecánico, un microambiente óptimo y un mimetismo de la estructura organizacional de los tejidos, postulándose como un potencial biomaterial para procesos de crecimiento celular en Medicina Regenerativa e Ingeniería de Tejidos.(AU)

Tissue regeneration using cells, growth factors and supports are an alternative in Regenerative Medicine. Silk fibroin is an excellent biosupport, its unique mechanical properties allow it to support processes of cell adhesion and growth. Objective: Evaluating the obtained silk´s fibroin from silkworm (Bombyx mori L) as a scaffold material for growth of dental pulp mesenchymal stromal cells (CMPD). Methods: The fibroin was obtained from silkworm (Bombyx mori L) cocoons reared at "The Pilamo" Farm, owned by the Universidad Tecnológica de Pereira. Procedures for obtaining full and resistant fibroin films to culture conditions were performed. The CMPD were obtained from a premolar tooth, the tooth was cut with a diamond blade to obtain the pulp which was subjected to enzymatic digestion. The cells obtained were subcultured until the second pass, and then, transferred to culture dishes containing fibroin films. This cells were cultured in standard conditions and tracking incubation with cell viability and growth for 27 days. Results: At the end of the incubation period, we realize that the fibroin films were intact and also this fibroin films allows cell growth.Conclusion: The use of fibroin as a natural biopolymer provides mechanical support, also an optimal microenvironment and mimic the organizational structure of tissues, so we postulated fibroin as a potential biomaterial for cell growth to be used in regenerative medicine and tissue engineering.(AU)

Adiponectin effect on nitric oxide secretion by normal and endometriotic human endometrial stromal cells: in vitro study / Efecto de la adiponectica sobre la secreción de óxido nítrico por células estromales de endometrio humano, normales y con endometriosis: estudio in vitro

Endometriosis is an estrogen-dependent disease in reproductive age women. Adiponectin and Nitric oxide (NO) have an important role in physiologic functions especially in human reproductive system. Levels of NO increased in the endometriosis patients but serum adiponectin levels decreased in woman with endometriosis. The aim of this study was to determine adiponectin effect on nitric oxide secretion by cultured normal and endometriotic human endometrial stromal cells. In this experimental study, normal (n= 10) and endometriotic endometrial biopsies (n= 10) were taken in sterile condition. Stromal cells isolated and cultured in in DMEM/ F12 medium and treated with adiponectin concentrations (0, 10, 100, and 200 ng/ml) for 24 and 48 hours. NO assay was done on their supernatants by Greiss method. Data was analyzed by one way ANOVA and p<0.05 was considered significant. There was significant difference between endometriosis groups in NO secretion in all dose of adiponectin and time (p<0.05). In normal groups there was significant difference in 48 hours (p<0.05) but no significant change in 24 hours (p>0.05). Adiponectin effects nitric oxide secretion of cultured human endometriotic stromal cells.

La endometriosis es una enfermedad dependiente de estrógenos que se presenta en mujeres en edad reproductiva. La adiponectina y el óxido nítrico (ON) tienen un papel importante en las funciones fisiológicas, especialmente en el sistema reproductivo humano. Los niveles de ON aumentan en los pacientes con endometriosis, pero los niveles de adiponectina en suero disminuyen. El objetivo fue determinar el efecto de la adiponectina sobre la secreción de ON por las células estromales de endometrio humano, tanto normales como con endometriosis, en medio de cultivo. En este estudio experimental, las células estromales de endometrio normales (n= 10) y las biopsias de endometrio con endometriosis (n= 10) se tomaron en condiciones de esterilidad. Las células estromales fueron aisladas y cultivadas en un medio DMEM/F12, y se sometieron a distintas concentraciones de adiponectina (0, 10, 100, y 200 ng/ml) durante 24 y 48 horas. El ensayo con ON se realizó a los sobrenadantes obtenidos por el método de Greiss. Los datos recolectados fueron analizados por ANOVA de una vía y un valor p<0,05 se consideró significativo. Entre los grupos con endometriosis, en referencia a la secreción de ON, no hubo diferencia significativa en todas las dosis de adiponectina y los tiempos estipulados (p<0,05). En los grupos normales, hubo diferencia significativa a las 48 horas (p<0,05), pero ningún cambio significativo a las 24 horas (p>0,05). La adiponectina tiene efectos sobre la secreción de óxido nítrico por las células estromales endometriales humanas en cultivo.

Fibroma ovárico con células estromales en anillo de sello: un tumor extremadamente infrecuente: diagnóstico diferencial del tumor de Krukenberg / Ovarian fibroma with stromal signet-ring cells: differential diagnosis of Krukenberg tumor

La presencia de "células en anillo de sello" en el tejido ovárico es el marcador histológico clásico del tumor de Krukenberg. Un adenocarcinoma metastásico altamente agresivo y de baja sobrevida. En cambio, los fibromas ováricos son tumores del estroma generalmente benignos. Presentamos un caso muy infrecuente de fibroma celular con presencia de células en anillo de sello y revisamos los criterios para el diagnóstico diferencial con el tumor de Krukenberg.

The presence of signet-ring cells in ovarian tissue is classically described as histological marker of Krukenberg tumor. It is highly aggressive metastatic adenocarcinoma with low survival. In contrast, ovarian fibroid is a stromal tumor usually benign. We present a very rare case of cellular fibroma with presence of signet-ring cells and we review the criteria for differential diagnosis of Krukenberg tumor.

Cultivo de células estromales de rata. Influencia del suero fetal bovino / Stromal rat cell culture. Influence of fetal calf serum

Las células madre estromales humanas y de roedores cultivadas pueden ser inducidas a diferenciarse en neuronas, enfatizando su utilidad potencial en la terapia celular neurorrestaurativa. Los sistemas de cultivo para la expansión de estas células describen el uso de diferentes proporciones de suero fetal, lo que motivó a estudiar qué concentración de suero fetal bovino era capaz de garantizar un adecuado rendimiento celular. Las células de la médula ósea de rata se cultivaron en medio a-MEM suplementado con 10 y 20 por cientode suero fetal bovino y se subcultivaron hasta 3 veces. La viabilidad celular de los cultivos primarios y los subcultivos estuvo por encima del 98 por ciento en ambos experimentos. Los cultivos primarios demoraron 17,4 días en confluir y los subcultivos 7,7 días. La concentración de suero fetal al 20 por ciento no aumentó significativamente la velocidad de multiplicación celular; no obstante, se obtuvo un mayor número de células estromales. El sistema de expansión in vitro podría utilizarse en estudios futuros para la expansión de las células estromales humanas, lo que sienta mejores bases para su aplicación clínica

Cultured human and rodents stromal stem cells can be induced to differentiate into neurons, emphasizing its potential use in neurorestorative cell therapy. Cropping systems for the expansion of these cells describe the use of different ratios of fetal serum, which led to study what concentration of fetal calf serum was able to ensure an adequate cell yield. Cells from rat bone marrow were cultured in medium supplemented with a-MEM 10 and 20 percent fetal bovine serum and subcultured up to 3 times. Cell viability of primary cultures and subcultures was above 98 percent in both experiments. Primary cultures converge delayed in 17.4 days and 7.7 days subcultures. The concentration of 20 percent fetal calf serum did not significantly increase the speed of cell division, however, we obtained a greater number of stromal cells. The expansion in vitro system could be used in future studies for the expansion of human stromal cells, which feels better basis for clinical application

Estandarización del aislamiento y caracterizaciónde células estromales de decidua y útero murinos / Estandardização do isolamento e caracterização de células estromales de decídua eútero murinos / Standardization of isolation and characterization of decidual stromal cells and murine uterus

Las células estromales son las células más abundantes presentes en la decidua y juegan un papelmuy importante durante la implantación, la nutrición fetal y el mantenimiento del embarazo. Losprocedimientos que se han descrito para el aislamiento de células estromales requieren el uso de muchosanticuerpos monoclonales ya que hay contaminación con otros tipos celulares en la decidua y ademásalgunos marcadores características de células estromales, muestran variabilidad en los diferentes díasde la gestación. En este estudio se estandarizó un procedimiento de aislamiento por digestión enzimática,gradiente de densidad y adherencia al plástico y se caracterizaron las células estromales murinas porexclusión de marcadores que se expresan en macrófagos (F4-80), células epiteliales y trofoblasto(citoqueratina-7), obteniéndose un 98% de células negativas para estos marcadores que correspondería alas células estromales. Esta técnica de aislamiento permite obtener células estromales con métodos menoscostosos y altamente eficientes que facilita el acceso a un modelo celular de gran utilidad en el estudio dela fisiología de la gestación en diferentes especies.

Stromal cells are the most abundant cell population present in decidual tissue; they are involved inkey processes during embryo implantation, fetal nutrition and the pregnancy maintenance. Described procedures for stromal cells isolation require the use of many monoclonal antibodies due to contaminationwith another cell types in the decidua; besides, some markers of stromal cells show variability during thedays of gestation. In this study, we standardized a procedure for isolation by enzymatic digestion, densitygradient and adherence to plastic. Murine stromal cells were characterized by exclusion of markers thatare expressed in macrophages (F4-80), epithelial cells and trophoblast (cytokeratin-7), yielding a 98% ofnegative cells for these markers that correspond to stromal cells. This isolation procedure permits to obtainstromal cells with less expensive and high efficiency methods that provide a useful cellular model to studythe physiology of gestation in different species.

As células estromales são as células mais abundantes presentes na decídua e tem um papel muitoimportante durante a implementação, a nutrição fetal e a manutenção da gravidez. Os procedimentosdescritos para o isolamento das células estromales necessitam o uso de muitos anticorpos monoclonais jáque há contaminação com outros tipos celulares na decídua e demais alguns marcadores característicosdas células estromales que tem variabilidade nos diferentes dias de gestação. No presente trabalho foiestandardizado um procedimento de isolamento por digestão enzimática, gradiente de densidade eaderência ao plástico e foram caracterizados as células estromales murinas por exclusão de marcadoresque expressão em macrófagos (F4-80), células epiteliais e trofoblasto (citoqueratina-7), obtendo-se um98% de células negativas para estes marcadores que corresponderia às células estromales. Esta técnicade isolamento permite obter células estromales com métodos menos custosos e altamente eficientes quefacilita o aceso a um modelo celular de grande utilidade no estudo da fisiologia da gestação em diferentesespécies.